Dithiothreitol (DTT) is een veelgebruikt reductiemiddel, ook wel het nieuwe groene additief genoemd.Het is een kleine moleculaire organische verbinding met twee mercaptaangroepen (-SH).Vanwege zijn reducerende eigenschappen en stabiliteit wordt DTT veel gebruikt in biochemische en moleculair biologische experimenten.
De belangrijkste rol van DTT is het verminderen van disulfidebindingen in eiwitten en andere biomoleculen.De disulfidebinding is een belangrijk onderdeel van de eiwitvouwing en -stabiliteit, maar onder bepaalde experimentele omstandigheden, zoals reduceerbare SDS-PAGE-analyse, eiwitrecombinatie en -vouwing, is het noodzakelijk om de disulfidebinding tot twee thiolgroepen te reduceren om de ruimtelijke structuur van het eiwit te ontrafelen. het eiwit.DTT kan reageren met disulfidebindingen om deze te reduceren tot mercaptaangroepen, waardoor de ruimtelijke structuur van het eiwit wordt geopend en het gemakkelijk wordt gemaakt om te analyseren en te manipuleren.
DTT kan ook worden gebruikt om de enzymactiviteit en stabiliteit te beschermen.Bij sommige door enzym gekatalyseerde reacties kan de activiteit van het enzym door het oxidatiemiddel worden verminderd.DTT kan reageren met oxidanten om deze te reduceren tot onschadelijke stoffen, waardoor de activiteit en stabiliteit van het enzym wordt beschermd.
Vergeleken met traditionele reductiemiddelen zoals β-mercaptoethanol (β-ME), wordt DTT beschouwd als een veiliger en stabieler reductiemiddel.Het is niet alleen stabiel in een waterige oplossing, maar behoudt ook zijn reducerende eigenschappen onder hoge temperaturen en zuur-base-omstandigheden.
Het gebruik van DTT is relatief eenvoudig.Over het algemeen wordt DTT opgelost in een geschikte buffer en vervolgens toegevoegd aan het experimentele systeem.De optimale concentratie DTT moet worden bepaald op basis van het specifieke experiment en wordt over het algemeen gebruikt in het bereik van 0,1-1 mM.Lagere concentraties kunnen de nadelige effecten op de celgroei verminderen en de cytotoxiciteit als gevolg van overexpressie van doeleiwitten verminderen.Hogere concentraties kunnen overmatige celmetabolische belasting veroorzaken, waardoor de celgroei en expressie-efficiëntie worden beïnvloed.
De manier om de optimale concentratie te bepalen kan zijn om het expressieniveau van het doeleiwit te evalueren door IPTG-inductietesten uit te voeren bij verschillende concentraties.Er kunnen kleinschalige kweektesten worden uitgevoerd met behulp van een reeks IPTG-concentraties (bijv. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, enz.) en het expressie-effect bij verschillende concentraties kan worden geëvalueerd door het expressieniveau van het doeleiwit te detecteren (bijv. Western blot- of fluorescentiedetectie).Volgens de experimentele resultaten werd de concentratie met het beste expressie-effect als de optimale concentratie gekozen.
Daarnaast kunt u ook de relevante literatuur of de ervaring van andere laboratoria raadplegen om inzicht te krijgen in het veelgebruikte IPTG-concentratiebereik onder vergelijkbare experimentele omstandigheden, en deze vervolgens te optimaliseren en aan te passen aan de experimentele behoeften.
Het is belangrijk op te merken dat de optimale concentratie kan variëren afhankelijk van verschillende expressiesystemen, doeleiwitten en experimentele omstandigheden, dus het is het beste om van geval tot geval te optimaliseren.
Samenvattend is DTT een veelgebruikt reductiemiddel dat kan worden gebruikt om disulfidebindingen in eiwitten en andere biomoleculen te verminderen en om de enzymactiviteit en stabiliteit te beschermen.Het wordt veel gebruikt in biochemische en moleculair biologische experimenten.
Posttijd: 28 september 2023