4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranoside CAS:200422-18-0

Werking: ONPG is een substraat dat specifiek wordt gebruikt om de aanwezigheid en activiteit van het enzym β-galactosidase aan te tonen. Wanneer het enzym β-galactosidase aanwezig en actief is, splitst het ONPG in twee producten: o-nitrofenol en een galactosederivaat. De vrijmaking van o-nitrofenol resulteert in een gele kleurverandering, die kan worden gemeten met een spectrofotometer.

Toepassing: ONPG heeft diverse toepassingen in moleculair biologisch en biochemisch onderzoek:

Bepaling van de β-galactosidase-activiteit: ONPG wordt vaak gebruikt om de activiteit van het β-galactosidase-enzym te meten en te kwantificeren. De snelheid van de o-nitrofenolvorming, die rechtstreeks evenredig is met de enzymactiviteit, kan spectrofotometrisch worden gemeten.

Genexpressie en -regulatie: ONPG wordt vaak gebruikt in experimenten met betrekking tot genexpressie- en -regulatiestudies. Het wordt veelvuldig toegepast in fusie-eiwitassays, zoals het veelgebruikte lacZ-fusiesysteem, om de expressie van genen onder controle van specifieke promotors te bestuderen. De met ONPG gemeten bèta-galactosidase-activiteit geeft inzicht in het niveau van genexpressie.

Screening op β-galactosidase-activiteit: ONPG kan worden gebruikt als een colorimetrische screeningsmethode in recombinant-DNA-technologie om de aanwezigheid en functionaliteit van het LacZ-gen, dat codeert voor β-galactosidase, te identificeren. Deze screeningsmethode helpt bij het identificeren van klonen die het gen van belang bevatten.

Enzymkinetiekstudies: ONPG is ook nuttig voor het bestuderen van de kinetiek van het β-galactosidase-enzym. Door de reactiesnelheid van het enzym-substraat bij verschillende substraatconcentraties te meten, is het mogelijk kinetische parameters te bepalen zoals de Michaelis-Menten-constante (Km) en de maximale reactiesnelheid (Vmax).