4-Nitrofenyl bèta-D-galactopyranoside CAS: 200422-18-0

Effect: ONPG is een substraat dat specifiek wordt gebruikt om de aanwezigheid en activiteit van het enzym β-galactosidase te detecteren.Wanneer het β-galactosidase-enzym aanwezig en actief is, splitst het ONPG in twee producten: o-nitrofenol en een galactosederivaat.Het vrijkomen van o-nitrofenol resulteert in een gele kleurverandering, die kan worden gemeten met een spectrofotometer.

Toepassing: ONPG heeft verschillende toepassingen in onderzoek in de moleculaire biologie en biochemie:

Bepaling van β-galactosidase-activiteit: ONPG wordt vaak gebruikt om de activiteit van β-galactosidase-enzym te meten en te kwantificeren.De snelheid van o-nitrofenolvorming, die direct evenredig is met de enzymactiviteit, kan spectrofotometrisch worden gemeten.

Genexpressie en regulatie: ONPG wordt vaak gebruikt in experimenten die verband houden met genexpressie- en regulatiestudies.Het wordt vaak gebruikt in fusie-eiwittesten, zoals het veelgebruikte lacZ-fusiesysteem, om de expressie van genen onder controle van specifieke promoters te bestuderen.De bèta-galactosidase-activiteit gemeten met ONPG geeft inzicht in het niveau van genexpressie.

Screening op β-galactosidase-activiteit: ONPG kan worden gebruikt als een colorimetrische screeningmethode in recombinant-DNA-technologie om de aanwezigheid en functionaliteit van het LacZ-gen, dat codeert voor β-galactosidase, te identificeren.Deze screeningmethode helpt bij het identificeren van klonen die het gen van interesse bevatten.

Onderzoek naar enzymkinetiek: ONPG is ook nuttig bij het bestuderen van de kinetiek van het β-galactosidase-enzym.Door de snelheid van de enzym-substraatreactie bij verschillende substraatconcentraties te meten, is het mogelijk om kinetische parameters te bepalen, zoals Michaelis-Menten-constanten (Km) en maximale reactiesnelheden (Vmax).