Hoe bepaal ik de optimale concentratie?
Voor de inductor IPTG (isopropyl-bèta-d-thiogalactoside) geldt: hoe hoger de concentratie, hoe beter.De optimale concentratie hangt af van de specifieke experimentele omstandigheden en het gewenste inductie-effect.
Over het algemeen wordt de concentratie IPTG gebruikt in het bereik van 0,1-1 mM.Lagere concentraties kunnen de nadelige effecten op de celgroei verminderen en de cytotoxiciteit als gevolg van overexpressie van doeleiwitten verminderen.Hogere concentraties kunnen overmatige celmetabolische belasting veroorzaken, waardoor de celgroei en expressie-efficiëntie worden beïnvloed.
De manier om de optimale concentratie te bepalen kan zijn om het expressieniveau van het doeleiwit te evalueren door IPTG-inductietesten uit te voeren bij verschillende concentraties.Er kunnen kleinschalige kweektesten worden uitgevoerd met behulp van een reeks IPTG-concentraties (bijv. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, enz.) en het expressie-effect bij verschillende concentraties kan worden geëvalueerd door het expressieniveau van het doeleiwit te detecteren (bijv. Western blot- of fluorescentiedetectie).Volgens de experimentele resultaten werd de concentratie met het beste expressie-effect als de optimale concentratie gekozen.
Daarnaast kunt u ook de relevante literatuur of de ervaring van andere laboratoria raadplegen om inzicht te krijgen in het veelgebruikte IPTG-concentratiebereik onder vergelijkbare experimentele omstandigheden, en deze vervolgens te optimaliseren en aan te passen aan de experimentele behoeften.
Het is belangrijk op te merken dat de optimale concentratie kan variëren afhankelijk van verschillende expressiesystemen, doeleiwitten en experimentele omstandigheden, dus het is het beste om van geval tot geval te optimaliseren.
Posttijd: 28 september 2023